ABSTRACT Lubricating greases are vital elements for proper operation and for extending the life of engines. At present, most of the lubricating greases on the market use mineral oil as base oil, which means that the disposal of these greases, after use, pollutes the environment, in addition to increasing prices, due to the increase in the prices of oil and its derivatives in the market generate a higher cost in the acquisition of these. The objective of this work was to obtain a lubricating bio-grease for engines, from by-products of African palm oil. For this, was used sodium hydroxide to obtain sodium soaps and, as base oil, as by-products from palm were used: crude oil, Stearin or Olein; In addition, mineral oil was used as a control. Different formulations were obtained using combinations of the oils, both in obtaining soaps and in obtaining bio-greases. As conclusions, it can be stated that a lubricating bio-grease was obtained with a composition of 93% crude palm oil, 6% sodium hydroxide and 1% defoamer, which presented physicochemical characteristics similar to commercial lubricating greases. In addition, according to the classification of the National Institute of Lubricating Greases, it could be classified as grade 2 lubricating bio-grease, that is a soft grease suitable for use in bearings, and valves, which are not subjected to high pressures or loads.

RESUMEN Las grasas lubricantes son elementos vitales para un buen funcionamiento y para alargar la vida útil de los motores. En la actualidad la mayoría de las grasas lubricantes que existen en el mercado utilizan como aceite base al aceite mineral, lo cual hace que el deshecho de estas grasas, después de su utilización, contamine el medio ambiente, además de que el aumento de los precios del petróleo y sus derivados en el mercado generan mayor costo en la adquisición de estas. El objetivo de este trabajo fue obtener una bio-grasa lubricante para motores, a partir de subproductos de palma africana. Para cumplir dicho objetivo, se utilizó al hidróxido de sodio para la obtención de jabones de sodio y como aceite base, como subproductos de la palma se utilizó: al aceite crudo, estearina u oleína; además se utilizó al aceite mineral como control. Se obtuvieron diferentes formulaciones utilizando combinaciones de los aceites, tanto, en la obtención de jabones, como en la obtención de la grasa. Como conclusiones se puede plantear que se obtuvo una grasa lubricante con una composición del 93% de aceite crudo de palma, 6% de hidróxido de sodio y 1% de antiespumante, que presentó características físico-químicas similares a las grasas lubricantes comerciales. Además, según la clasificación del Instituto Nacional de Grasas Lubricantes, se pudo clasificar como bio-grasa lubricante de grado 2, es decir, es una grasa blanda apta para su empleo en rodamientos, cojinetes y válvulas, que no sean sometidos a altas presiones ni cargas.

Vi polysaccharide from Salmonella Typhi is a T-independent antigen that has proven to be protective in young adults. However, it has been conjugated to proteins in order to confer T-dependent properties to the polysaccharide, and improving the antibody response. The regulatory agencies require knowing the identity of antigens included in vaccines. The Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy and serological techniques are recommended. The aim of this work was to establish the optimal working conditions of a Dot Blot that would allow to determine quickly the identity of the antigens in conjugate vaccines against S. Typhi. The incubation times, optimum concentrations of monoclonal antibodies (MAb) and active pharmaceutical ingredient (API), as well as optimum application volumes for APIs and vaccine formulations were studied for both, PsVi and diphtheria toxoid (DT). It was proven that 5 µL of samples of the monovalent conjugates were sufficient at a dilution of 1/10 (vol/vol) and an equal volume for the vaccine formulations. It was demonstrated that the concentration of 2.5 µg/mL for the MAb against PsVi and 2 µg/mL for the MAb against DT were suitable. The incubation times were adjusted to 15 min with incubation at 37 ºC. It was established a simple and rapid method for the specific identification of PsVi and DT present in API and conjugate vaccines.

El polisacárido Vi (PsVi) de Salmonella Typhi es un antígeno T-independiente y ha demostrado ser protector en adultos jóvenes. Sin embargo, para aumentar la respuesta de anticuerpos y conferir propiedades T-dependientes al polisacárido, se ha conjugado a proteínas. Dentro de los controles exigidos por los organismos regulatorios para estas vacunas está la identidad antigénica de sus componentes y para eso se recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas. El objetivo del presente trabajo, fue establecer las condiciones óptimas de trabajo de un Dot Blot que permitiera determinar, rápidamente, la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas contra S. Typhi. Para ello, se estudiaron los tiempos de incubación, las concentraciones óptimas de anticuerpo monoclonal (AcM) y del ingrediente farmacéutico activo (IFA), así como los volúmenes de aplicación óptimos para las IFAs y formulaciones vacunales, tanto para el PsVi como para el toxoide diftérico (TD). Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 5 µL de muestras de los conjugados monovalentes en una dilución de 1/10 (vol/vol) e igual volumen para las formulaciones vacunales. Quedó demostrado que la concentración de 2,5 µg/mL para el AcM contra el PsVi y a 2 µg/mL para el AcM contra TD fueron suficientes para la determinación; mientras que los tiempos de incubación fueron ajustados a 15 min con incubación a 37 ºC. Como conclusión del trabajo se puede decir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para la determinación rápida de la identidad antigénica del PsVi y del TD presentes en IFA y formulaciones vacunales conjugadas.

ABSTRACT Regulatory authorities recommend the use of NMR (Nuclear Magnetic Resonance) techniques or serological techniques to determine the identity of antigens on the conjugate vaccines. Due to the emergence of multivalent conjugate vaccines it has become necessary to use immunochemical techniques with the use of monoclonal antibodies (MAbs) in order to increase the sensitivity in determining the identity of such antigen in the conjugate vaccines. The aim of this study was to establish the optimal working conditions that would allow using Dot Blot technique to determine the identity of antigens in conjugate vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F. The incubation times, the possibility of using different reagents for blocking step were studied for this purpose; also the optimal concentrations of MAbs and active pharmaceutical ingredients (APIs), as well as the volumes of optimal application for APIs and vaccines. A monoclonal antibody against the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F (PsC 19F) was used. The samples used in this work, were samples of lots of APIs of monovalent conjugated PsC 19F and lots of Cuban heptavalent conjugate vaccine candidate against pneumococcus. The results showed that for the determination of the antigenic identity were optimal volumes of 10 µL of monovalent conjugate samples at 125 µg/mL and equal volume for heptavalent vaccines. For MAb was demonstrated that 1 µg/mL concentration of MAb against the PSC 19F and incubation times of 30 min at 37 °C were sufficient to successfully perform the determinations. In conclusion we can say that were established optimal working conditions to determine the antigenic identity, by Dot Blot, for the capsular polysaccharide of S. pneumoniae serotype 19F present in the APIs of monovalent conjugated and in the heptavalent conjugate vaccines.

RESUMEN Las autoridades regulatorias recomiendan el uso de técnicas de Resonancia Magnética Nuclear o técnicas serológicas para la determinación de la identidad de los antígenos presentes en las vacunas conjugadas. Con la aparición de las vacunas conjugadas multivalentes, se ha hecho necesario recurrir a técnicas inmunoquímicas con la utilización de anticuerpos monoclonales para aumentar la sensibilidad en la determinación de la identidad de los antígenos en dichas vacunas conjugadas. El objetivo del presente trabajo fue establecer las condiciones óptimas de trabajo que permitieran utilizar la técnica del Dot Blot para determinar la identidad de los antígenos en vacunas conjugadas de Streptococcus pneumoniae serotipo 19F. Para ello se estudiaron los tiempos de incubación, la influencia del reactivo en la solución de bloqueo; también las concentraciones óptimas del anticuerpo monoclonal y de los ingredientes farmacéuticos activos, así como los volúmenes de aplicación óptimos para estos y vacunas. Se utilizó un anticuerpo monoclonal contra el polisacárido capsular del serotipo 19F de neumococo. Las muestras empleadas en este trabajo fueron lotes de ingredientes farmacéuticos activos de conjugados de polisacárido capsular 19F y lotes de un candidato vacunal cubano conjugado heptavalente contra neumococos. Los resultados mostraron que para la determinación de la identidad antigénica fueron suficientes 10 µL de muestras de los principios activos a una concentración de 125 µg/mL e igual volumen para las vacunas heptavalentes. Quedó demostrado que una concentración de 1 µg/mL para el anticuerpo monoclonal y tiempos de incubación de 30 min a 37 °C fueron suficientes para la determinación. Estos resultados permiten concluir que quedaron establecidas las condiciones óptimas de trabajo para determinar la identidad antigénica por Dot Blot del polisacárido capsular de S. pneumoniae serotipo 19F presente en las vacunas conjugadas.

Neisseria meningitidis serogroups A, B, C, W, Y and X are the main responsible of meningococcal disease. Vaccines are necessary to prevent this disease. The Finlay Institute is developing polysaccharide vaccines against serogroups A, C, W, Y and X. In the development of vaccines, the identity assay is a mandatory requirement for final product release. This test is performed by Dot Blot technique using commercial polyclonal antibodies (PAb). However, the Finlay Institute has monoclonal antibodies (mAbs) against capsular polysaccharides from N. meningitidis (CPs). The objective of this work was to use these mAbs in identity tests to replace commercial PAb. The specificity of the mAbs, the cross-reactivity with other CPs and the identity of the CPs present in four multivalent polysaccharide vaccines, were evaluated. All tested mAbs showed high specificity, and no cross-reactivity was found. Also all mAbs were able to identify the presence of homologous PsC in multivalent vaccine formulations. We conclude that the mAbs obtained in our institution can be used for identity assays of vaccines.

Los serogrupos A, B, C, W, Y y X de Neisseria meningitidis (Nm) son los principales responsables de la enfermedad meningocóccica y contra ellos va dirigido actualmente el desarrollo de vacunas para la prevención de la enfermedad. El Instituto Finlay se encuentra desarrollando vacunas antimeningocóccicas polisacarídicas contra los serogrupos A, C, W, Y y X. En el desarrollo de estas vacunas, el ensayo de identidad constituye un requisito obligatorio para la liberación final del producto. Este ensayo se realiza mediante la técnica Dot Blot, utilizando anticuerpos policlonales (AcP) comerciales; sin embargo, el Instituto Finlay cuenta en este momento con una plataforma de Anticuerpos Monoclonales (AcM) contra los cinco polisacáridos (PsC) de Nm. El objetivo del trabajo fue evaluar la sensibilidad y especificidad de estos AcM para su uso en los ensayos de identidad de las vacunas antimeningocócicas polisacarídicas, con vista a sustituir los AcP comerciales empleados hasta el momento. La sensibilidad de los AcM se evaluó frente al PsC homólogo y la especificidad frente al resto de los PsC de Nm. Se realizó el ensayo de identidad por Dot Blot a cuatro vacunas polisacarídicas multivalentes, usando los AcM comparativamente con los AcP. Todos los AcM evaluados mostraron una alta sensibilidad y especificidad, no encontrándose reactividad cruzada y siendo capaces de identificar en las formulaciones vacunales multivalentes la presencia del PsC homólogo. Concluimos que los AcM obtenidos en nuestro instituto pueden ser usados para los ensayos de identidad de las vacunas.

Aquaculture represents one of the fastestgrowing animal foodproducing sectors worldwide. One of the main challenges is to obtain highvolume production with the highest possible quality, this leads to reduce the use of antibiotics and chemotherapeutics. A promising solution to these problems is the application of immunepotentiatiors mainly in intensive farming. This article aims to review the main immunepotentiators, as well as the trends and challenges of global use of them. It summarizes the main molecular and functional characteristics with emphasis on those most studied such as levamisole, ß-glucans, lipopolysaccharide, vitamin C, plant extracts and hormones. All these heterogeneous compounds, mostly affect the innate immunity of fish, strengthening and enhancing disease resistance and some of them additionally have antistress effect and promote fish growth. We conclude that immunepotentiators are a viable strategy to reduce losses for health problems in aquaculture field, however, aspects such as administration route and appropriate immunization phase for each species remains to be solved.

La acuicultura es una de las actividades económicas de mayor crecimiento para la producción de alimentos. Uno de sus principales retos es la obtención de grandes volúmenes de producción con la mayor calidad posible. Esto conlleva a una reducción de la aplicación de antibióticos y productos quimioterapéuticos. Una de las estrategias más prometedoras es la aplicación de inmunopotenciadores, principalmente en los cultivos intensivos. El objetivo de este trabajo fue revisar los principales inmunopotenciadores, así como las tendencias y retos de su uso mundial. Se resumen las particularidades moleculares y funcionales de los mismos y se hace énfasis en los más estudiados: levamisol, ß-glucanos, lipopolisacárido, vitamina C, extractos de plantas y hormonas. Todos estos compuestos de naturaleza heterogénea inciden mayoritariamente en los componentes de la inmunidad innata de los peces, fortaleciendo y potenciando la resistencia a enfermedades; adicionalmente algunos de ellos tienen funciones antiestrés y favorecen su crecimiento. Se concluye que los inmunopotenciadores constituyen una estrategia viable para reducir las pérdidas por problemas sanitarios en el sector de la acuicultura; pero aún quedan por solucionar aspectos como la vía de administración y la etapa de inmunización adecuada para cada especie y tipo de cultivo.

For several years, Finlay Institute, in collaboration with the "Norwegian Institute of Public Health", is working in a project to obtain a vaccinal candidate from outer membrane vesicles (OMV) of N. meningitis serogroups A, W135 and X. To establish the quality specifications dealing with lipopolysaccharides (LPS), main cause of the pirogenicity of vaccines, is a necessity in this project. This work aims at establishing the conditions of SDS-PAGE to be used as a method for the quality control of the OMV as active pharmaceutical ingredient obtained from N. meningitidis serogroups A, W135 and X. The immunotypes of LPS were determined in studies as well as their concentrations as contaminants of OMV. SDS-PAGE gels at 15% and LPS samples from different serogroups were used; these gels were tinted with silver, specific for LPS, and the results were analyzed in a densitometer GS-800 (Bio-Rad) controlled by the program "Quantity One". As a result, LPS profile curves for each serogroup were obtained and the concentration of residual LPS in the OMV of different serogroups of N. meningitidis was quantified. As conclusion, the methodology to determine the concentration of LPS from N. meningitidis serogroups A, X and W135 in samples of OMV with SDS-PAGE was established, in addition the established quality specifications for this parameter were confirmed.

Desde hace varios años el Instituto Finlay, en colaboración con el Instituto Noruego para la Salud Pública, trabajan en un proyecto para la obtención de candidatos vacunales a partir de vesículas de membrana externa (VME) de Neisseria meningitidis serogrupos A, W135 y X. Por ello es necesario establecer las especificaciones de calidad para el lipopolisacárido (LPS), principal causante de la pirogenicidad de estas vacunas. El objetivo de este reporte fue establecer las condiciones del SDS-PAGE como método de control de la calidad de las VME como ingrediente farmacéutico activo (IFA), provenientes de N. meningitidis serogrupos A, W135 y X. Se determinaron los inmunotipos y las concentraciones de LPS contaminantes, para lo cual se utilizaron geles de SDS-PAGE al 15% y muestras de LPS de los diferentes serogrupos de N. meningitidis. Se realizó el revelado de los geles con tinción con plata específica para LPS y los resultados se analizaron en un densitómetro GS-800 (Bio-Rad , controlado por el programa "Quantity One". Se obtuvieron curvas patrones para cada LPS que determinaron la concentración de LPS en estas muestras y se comprobó la utilidad del método al cuantificar la concentración de LPS en muestras de IFAs de VME de los diferentes serogrupos de N. meningitidis. Así se estableció la metodología para determinar la concentración de LPS de N. meningitidis serogrupos A, X y W135 en muestras de IFA de VME con el SDS-PAGE y se confirmaron las especificaciones de calidad establecidas para este parámetro.

The search of adjuvants has been one of the most important lines of the research in the development of vaccines in the last decades. One of the adjuvants under research at Finlay Institute uses lipopolysaccharide (LPS) from Neisseria meningitidis serogroup B in its composition and it is very toxic. For this reason we aim to make a structural modification of LPS from N. meningitidis serogroup B to reduce its toxicity and to study its stability for three months. A LPS purified by water and phenol extraction method was modified structurally by a controlled basic hydrolysis. The modified LPS was controlled at moment of the hydrolysis, a month and three months later. The evaluations consisted on the determination the concentrations of amine groups generated, the toxicity by Limulus Amoebocyte Lysate (LAL), the determination of the electrophoretic pattern and the constant of distribution (Kd) by chromatography of molecular exclusion as indicative parameters of structural integrity. The obtained results showed an increase of amine groups, a reduction of more than 5 000 times of the initial toxicity of native LPS and an increase of the Kd determined by chromatography. Studied parameters remained constant in the three studied months. In summary, modified structurally LPS by means of a controlled basic hydrolysis and stored in watery solution and temperatures from 2 to 8 °C remains without changes in their structure at least for three months

La búsqueda de adyuvantes está dentro de las líneas de investigación más importantes para el desarrollo de vacunas en las últimas décadas. Uno de los adyuvantes, en etapa de investigación en el Instituto Finlay, tiene en su composición al lipopolisacárido (LPS) de Neisseria meningitidis serogrupo B, el cual es altamente tóxico. Por ello nos propusimos modificarlo estructuralmente, para reducir su toxicidad y evaluar su estabilidad durante tres meses. Se utilizó un LPS purificado por el método de extracción con agua y fenol y se modificó estructuralmente por una hidrólisis básica controlada. El LPS resultante fue evaluado en el momento de la hidrólisis, al mes y a los tres meses. Se midió la concentración de grupos amino generados y la toxicidad por el método del lisado de amebocitos del limulus (LAL); se determinó el patrón electroforético y la constante de distribución (Kd) por cromatografía de exclusión molecular, como parámetros indicativos de la integridad estructural. Los resultados mostraron un aumento de los grupos amino, una reducción de la toxicidad en más de cinco mil veces que la inicial del LPS nativo y un incremento de la Kd, determinada por cromatografía. Todos los parámetros estudiados durante los tres meses se mantuvieron constantes. Se puede concluir que el LPS, modificado estructuralmente por medio de una hidrólisis básica controlada y almacenado en solución acuosa a temperaturas entre 2 y 8 °C, permaneció sin cambios en su estructura al menos por tres meses

The objective of the study was to determine the T-cell epitopes of four of the most frequent antigenic proteins of the outer membrane of Neisseria meningitidis B, and to identify the most relevant sites for molecular mimicry with T-cell epitopes in humans. In order to do so, an in silico study -a type of study that uses bioinformatic tools- was carried out using SWISS-PROT/TrEMBL, SYFPEITHI and FASTA databases, which helped to determine the protein sequences, CD4 and CD8 T-cell epitope prediction, as well as the molecular mimicry with humans, respectively. Molecular similarity was found in several human proteins present in different organs and tissues such as: liver, skin and epithelial tissues, brain, lymphatic system and testicles. Of these, those found in testicles were more similar, showing the highest frequency of mimetic sequences. This finding shed light on the success of N. meningitidis B to colonize human tissues and the failure of certain vaccines against this bacterium, and it even helps to explain possible autoimmune reactions associated with the infection or vaccination.

El objetivo del estudio fue determinar los epítopes T de cuatro de las proteínas antigénicas más frecuentes de la membrana externa de Neisseria meningitidis B e identificar los sitios más relevantes donde existe mimetismo molecular para estos epítopes en seres humanos. Para ello se realizó un estudio in silico (estudios que usan herramientas bioinformáticas) usando las bases de datos SWISS-PROT/TrEMBL SYFPEITHI y FASTA, las cuales se emplearon para la determinación de las secuencias proteicas, la predicción de los epítopes T CD4 y CD8, y la determinación del mimetismo molecular en humanos, respectivamente. Se encontró similitud molecular en varias proteínas humanas presentes en diferentes órganos y tejidos, entre ellos: hígado, piel y epitelios, cerebro, sistema linfático y testículos, destacando las encontradas en estos últimos, ya que ellas mostraron la frecuencia más alta de secuencias miméticas. Este hallazgo ayuda a comprender el éxito de N. meningitidis B para colonizar tejidos humanos, el fracaso de ciertas vacunas contra esta bacteria e incluso ayuda a explicar posibles reacciones autoimmunes asociadas a la infección o vacunación.

The objective of the study was to determine the T-cell epitopes of four of the most frequent antigenic proteins of the outer membrane of Neisseria meningitidis B, and to identify the most relevant sites for molecular mimicry with T-cell epitopes in humans. In order to do so, an in silico study -a type of study that uses bioinformatic tools- was carried out using SWISS-PROT/TrEMBL, SYFPEITHI and FASTA databases, which helped to determine the protein sequences, CD4 and CD8 T-cell epitope prediction, as well as the molecular mimicry with humans, respectively. Molecular similarity was found in several human proteins present in different organs and tissues such as: liver, skin and epithelial tissues, brain, lymphatic system and testicles. Of these, those found in testicles were more similar, showing the highest frequency of mimetic sequences. This finding shed light on the success of N. meningitidis B to colonize human tissues and the failure of certain vaccines against this bacterium, and it even helps to explain possible autoimmune reactions associated with the infection or vaccination.

El objetivo del estudio fue determinar los epítopes T de cuatro de las proteínas antigénicas más frecuentes de la membrana externa de Neisseria meningitidis B e identificar los sitios más relevantes donde existe mimetismo molecular para estos epítopes en seres humanos. Para ello se realizó un estudio in silico (estudios que usan herramientas bioinformáticas) usando las bases de datos SWISS-PROT/TrEMBL SYFPEITHI y FASTA, las cuales se emplearon para la determinación de las secuencias proteicas, la predicción de los epítopes T CD4 y CD8, y la determinación del mimetismo molecular en humanos, respectivamente. Se encontró similitud molecular en varias proteínas humanas presentes en diferentes órganos y tejidos, entre ellos: hígado, piel y epitelios, cerebro, sistema linfático y testículos, destacando las encontradas en estos últimos, ya que ellas mostraron la frecuencia más alta de secuencias miméticas. Este hallazgo ayuda a comprender el éxito de N. meningitidis B para colonizar tejidos humanos, el fracaso de ciertas vacunas contra esta bacteria e incluso ayuda a explicar posibles reacciones autoimmunes asociadas a la infección o vacunación.

Sexually transmitted infections by Herpes Simplex Virus type 2 (HSV-2) are the leading cause of genital ulcers and a major public health problem worldwide. This requires the use of mucosal vaccines, because parenteral vaccines have not been successful. Presently, there are not mucosal adjuvants, for this reason the development of adjuvants is essential for mucosal vaccine strategies. The intranasal (IN) immunizations using HSV-2 glycoprotein D (gD2), coadministered with cochleate (AFCo1+gD2), would be an efficient candidate for future vaccines against HSV2, similar to the gD2 incorporated into AFCo1(AFCo1-gD2). Female C57Bl/6 mice were inoculated with AFCo1-gD2, AFCo1+gD2 or gD2 alone by IN route. The anti gD2 IgG in sera and vaginal fluids and IgG subclasses were measured by ELISA. The lymphoproliferative response in spleen cells, the Th1/Th2 cytokine profile, the protection and the signs of disease against viral challenge were measured. High titers of IgG and IgG2c subclasses were observed in sera of mice that received the gD2 and AFCo1 as adjuvant. No significant differences (p>0.005) were observed in the animals that received AFCo1+gD2 or AFCo1-gD2. a preferential Th1 cytokine profile and 100% of survival after challenge were observed in both groups that received the gD2 and AFCo1, while no survival was observed in the group that only received the gD2. These results showed that the gD2 can be used coadministered with AFCo1 by IN route as a potential vaccine candidate against HSV-2.

La infección por virus herpes simple tipo 2 (VHS-2) continúa siendo un problema de salud mundial. Esta infección es transmitida sexualmente y es la principal causa de úlceras genitales. La prevención de esta enfermedad requiere de la utilización de vacunas mucosales, pues las vacunas parenterales no han sido exitosas. Por otra parte, no existen adyuvantes mucosales, por lo que el desarrollo de estos es esencial para la estrategia de estas vacunas. La administración intranasal (IN) de la glicoproteína D del VHS-2 (gD2), coadministrada con el cocleato (AFCo1+gD2) sería igualmente efectiva con la gD2 incluida (AFCo1-gD2). Se inocularon ratones hembras C57BL/6 por la vía IN con gD2, contenida dentro del cocleato, coadministrada con el cocleato o gD2 sola. Se determinaron los niveles de IgG anti gD2 en suero y lavado vaginal, así como las subclases de IgG anti gD2 por ELISA. Se determinó la respuesta linfoproliferativa en células de bazo, el perfil de citoquinas Th1/Th2, los signos de la enfermedad y la protección frente al reto viral. Se observaron altos títulos de IgG e IgG2c anti gD2 en el suero de los animales inoculados con la gD2 y el AFCo1 como adyuvante. No se observaron diferencias significativas (p>0,05) entre los grupos que recibieron AFCo1+gD2 y los que recibieron AFCo1-gD2. Se observó un perfil de citoquinas tipo Th1 y un 100% de sobrevida en los grupos que recibieron el AFCo1 como adyuvante de la gD2, mientras que en el grupo que recibió la gD2 sola no se observó protección. Estos resultados indican que la gD2 puede ser utilizada coadministrada con AFCo1 por vía IN como un potencial candidato vacunal contra VHS-2.

Mucosal vaccines are a promising strategy to induce mucosal protection. Herpes simplex virus type 2 is the commonest pathogens in the human transmitted by exposure at the genital mucosal surfaces. Many vaccine candidates against this pathogen have been evaluated; but they have not been effective, and neither a prophylactic nor a therapeutic vaccine has been yet obtained. The gD2 is a recombinant glycoprotein and it is reported as one of the antigens of importance for vaccine against this virus. There is the cochleate (AFCo1) derived from proteoliposome of Neisseria meningitidis serogroup B. This cochleate has shown potentialities as adjuvant for several immunization routes. The objective of this study was to evaluate the protection induced in mice by the AFCo1-gD2 administered by different mucosal routes. Female mice C57BL/6 were used and immunized by: intranasal (IN), intravaginal (IVag), or intrarectal (IR) routes with AFCo1-gD2 or gD2 alone. The anti-gD2 IgG and specific cellular proliferation were determined and the viral replication in vaginal wash, the signs of disease and the protection against the viral challenge, were measured too. A significant anti-gD2 IgG response was obtained by all routes, although the IN route showed the highest values. Cellular proliferation was observed in cells of animals immunized IN and IVag route; but not by IR route. In addition, a higher protection (100%) in the animals immunized with AFCo1-gD2 by IN route was observed. In conclusion the intranasal is the most promising route in the protection induction against this viral challenge.

Las vacunas mucosales se han planteado como una estrategia prometedora para inducir protección mucosal. El virus herpes simple tipo 2 es uno de los patógenos más frecuentes en el humano transmitidos por vía sexual. Varios candidatos vacunales contra este patógeno se han evaluado, pero no han sido efectivos, por lo que aún no se cuenta con una vacuna profiláctica ni terapéutica. La gD2 es una glicoproteína recombinante y está reportada como uno de los antígenos de importancia vacunal contra este germen. Contamos con el cocleato derivado del proteoliposoma de Neisseria meningitidis serogrupo B (AFCo1) que ha mostrado capacidades adyuvantes por varias vías de inmunización. El objetivo de este trabajo fue evaluar la protección inducida en ratones por el AFCo1-gD2, administrada por diferentes vías mucosales. Se utilizaron ratones hembras C57BL6, los cuales fueron inmunizados por vía intranasal (IN), intravaginal (IVag) o intrarrectal (IR) con AFCo1-gD2 o gD2 sola. Se determinó la IgG anti gD2, la proliferación celular específica, la replicación viral en lavado vaginal, los signos de la enfermedad y la protección frente al reto viral. Se obtuvo respuestas significativas de IgG anti gD2 por todas las vías, aunque la IN mostró los valores más elevados. Se observó proliferación celular en células de animales inmunizados IN e IVag, pero no por vía IR. Se observó la mayor protección (100%) en los animales inmunizados por vía IN. Se concluye que la vía nasal es la más prometedora en la inducción de protección contra este reto viral.

Neisseria gonorrhoeae infections are common sexually transmitted diseases. Increased antibiotic-resistant of N. gonorrhoeae strains were reported. N. meningitidis is another human restricted bacterium transmitted through mucosa. However, the induction of systemic specific IgG antibody against some proteins between the two species is known, but the mucosal immune response to these pathogens is not clear. We hypothesized that N. meningitidis could induce immune response against N. gonorrhoeae. Therefore, serogroup B Proteoliposome (PL) was transformed into AFCo1 (Adjuvant Finlay Cochleate 1) and used for nasal immunization of C57Bl/6 mice. The specific IgG and IgG subclasses against both antigens in sera and vaginal extraction were measured by ELISA. Specific proliferation (3H incorporation) of spleen cells and lymph node recall in vitro with PL or N. gonorrhoeae total antigens was measured. Serum and vaginal extraction anti N. meningitidis and N. gonorrhoeae IgG as well as the induction of specific IgG subclasses were detected. N. gonorrhoeae induces specific proliferation of spleen, cervical lymph node (cLN), and mediestinal (meLN) cells from immunized mice. In conclusion, AFCo1 induce anti N. meningitidis immune responses that recognized N. gonorrhoeae antigens in mice.

Mucosal vaccination offers attractive advantages to conventional systemic vaccination. Most pathogens enter or establish infection at mucosal surfaces. This represents an enormous challenge for vaccine development. Nevertheless, the availability of safe and effective adjuvants that function mucosally is the major limitation. Therefore, we investigated the impact of mucosal immunization with the Neisseria meningitidis B proteoliposome (AFPL1, Adjuvant Finlay Proteoliposome 1) and its-derived cochleate (Co, AFCo1). They contain multiple PAMPs as immunopotentiators and have delivery system ability as well as Th1 polarization activity. Groups of female mice were immunized by nasal, oral, intravaginal, or intramuscular routes with three doses with AFPL1/AFCo1 alone or containing ovalbumin or glycoprotein (g) D2 from Herpes Simplex Virus type 2 (HSV-2). High levels of specific IgG antibodies were detected in sera of mice vaccinated with either route. However, specific IgA antibodies were produced in saliva and vaginal wash only following mucosal delivering. The polarization to a Th1 pattern was confirmed by testing the induction of IgG2a/IgG2c antibody, positive delayed-type hypersensitivity reactions, and gIFN production. Additionally, AFCo1gD2 showed practically no vaginal HSV-2 replication and 100% protection against lethal vaginal HSV-2 challenge. In conclusion, the results support the use of AFCo1 as potent Th1 adjuvant for mucosal vaccines, particularly for nasal route.

Neonates have a poorly developed immune system. Respiratory pathogens cause disease during early periods of live. Consequently, it is important to develop protective vaccines that induce immunity and immunological memory against respiratory pathogens early in life. Intranasal (i.n.) route could be an effective via for immunization. Therefore, we explored the effectiveness of AF (Adjuvant Finlay) PL1 (Proteoliposome) from Neisseria meningitidis serogroup B and its derivate Cochleate (AFCo1) by nasal route in neonatal mice. They were immunized i.n. 3 times 7 days apart and anti PL systemic and mucosal antibody response were measured by ELISA. In addition, a prime-boost strategy was used to evaluate the humoral immune response in neonate mice. The 3 doses of AFPL1 or AFCo1 induced significant levels of anti PL IgG antibodies in comparison whit control, but AFCo1 (2017 U/mL) was significantly higher than AFPL1 (1107 U/mL). AFCo1 and AFPL1 induced a predominant Th1 pattern with IgG2a/IgG1 >1 by i.n. immunization and AFCo1 induced a high anti PL IgA saliva response in saliva. Interestingly, one nasally prime at 7 days of born and a memory one boost i.n. dose 9 weeks later with AFCo1 or AFPL1 showed similar specific IgG levels and IgG2a/IgG1 relation than 3 i.n. doses in adult mice. In conclusion, these results represent the first report of neonatal intranasal vaccination using AFCo1 capable to induce systemic and mucosal immunity and priming for memory.

The appropriate standardization of an analytical assay, followed by the validation of the method and the homogeneity of the chemical and biological reagents used during the different studies are indispensable elements for obtaining optimal results. In this work a methodology was selected for the validation of the analytical method used to determine ribose by the orcinol method using a standard ribose solution (0,025 mg/mL). An analysis of the main validation criteria: linearity, precision, accuracy, sensitivity, specificity, detection limits and robustness were carried out. The usefulness of this procedure was demonstrated and by means of the experimental design and the statistical procedures used, the linearity (r2>0,98), exactness (Fexp. <Ftab. and texp. <ttab.), preciseness (CV<3%), sensitivity (LD = 1 ug/mL and LC = 3.3 ug/mL) and specificity (non significant answer) of the method were verified, for which reasons it is considered reliable. The determination of ribose is a colorimetric assay that quantifies pentoses and is used with the objective of knowing the exact pentose contents in a sample of purified product. It is also used as a final control for Haemophilus influenzae conjugated vaccines according to WHO.

La adecuada estandarización de un ensayo analítico, seguido de la validación del método y la homogeneidad de los reactivos químicos y biológicos a lo largo de los diferentes estudios, son elementos imprescindibles para alcanzar óptimos resultados. En este trabajo se seleccionó una metodología para la validación del método analítico empleado en la determinación de ribosa por el método del orcinol y se utilizó una solución estándar de ribosa (0,025 mg/mL). Se realizó un análisis de los criterios fundamentales de validación: linealidad, precisión, exactitud, sensibilidad, especificidad, límites de detección y robustez. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento y se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dicho método es lineal (r2>0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso (CV<3 %), sensible (LD = 1 ug/mL y LC = 3.3 ug/mL) y específico (respuesta no significativa), por lo cual es confiable. La determinación de ribosa es una técnica colorimétrica que cuantifica pentosas y se emplea con el objetivo de conocer el contenido exacto de la misma en una muestra de producto purificado. Además es empleada como control final según la OMS en las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae.